High Performance Vloeibare Chromatografie (HPLC)

Hoewel tweedimensionale gelelektroforese (2-DE) een veelgebruikte methode is voor het analyseren van het hele proteoom, heeft het beperkingen zoals beperkt scheidingsvermogen, discriminerend effect en gecompliceerde bedieningsprocedures. Het is vaak moeilijk om bevredigende resultaten te verkrijgen voor de analyse van een groot dynamisch bereik, lage overvloed en hydrofobe eiwitten. Chong et al. gebruikten HPLC/massaspectrometrie om de differentiële expressie van pre-maligne en kankereiwitten te vergelijken en te analyseren. Het eiwit werd gescheiden door HPLC en de verzamelde fracties werden geïdentificeerd door MALDI-TOF-MS, zodat het eiwit kwantitatief werd geanalyseerd in de differentiële expressie van de twee soorten cellen. Als nieuw type scheidingstechnologie heeft multidimensionale vloeistofchromatografie niet de beperking van relatieve moleculaire massa en iso-elektrisch punt. Door de combinatie van verschillende modi elimineert het het discriminerende effect van tweedimensionale gelelektroforese. Het heeft de kenmerken van hoge piekcapaciteit en eenvoudige automatisering. Tweedimensionale ionenuitwisseling-omgekeerde fasechromatografie (2D-IEC-RPLC) is het meest gebruikte multidimensionale vloeistofchromatografiescheidingssysteem in proteomics onderzoek.